光學(xué)顯微鏡作為精密光學(xué)儀器，其操作規(guī)范性直接影響成像質(zhì)量、設(shè)備壽命及用戶安全。本文結(jié)合顯微鏡的工作原理與實(shí)驗(yàn)室管理標(biāo)準(zhǔn)，系統(tǒng)梳理日常操作的核心規(guī)范，涵蓋使用前準(zhǔn)備、操作流程、維護(hù)保養(yǎng)及安全注意事項(xiàng)四大模塊。
一、使用前準(zhǔn)備：奠定規(guī)范操作基礎(chǔ)
環(huán)境檢查
溫濕度控制：確保室溫20±2℃、濕度<60%，避免光學(xué)部件霉變或機(jī)械部件熱脹冷縮。
防震隔離：將顯微鏡置于專用防震臺(tái)或橡膠減震墊上，隔離外部振動(dòng)（如人員走動(dòng)、設(shè)備運(yùn)行）。
清潔度要求：操作區(qū)域空氣潔凈度應(yīng)達(dá)ISO 14644-1標(biāo)準(zhǔn)Class 7（≥0.5μm顆粒物≤352000個(gè)/m3），減少灰塵沉積。
設(shè)備狀態(tài)確認(rèn)
外觀檢查：
目鏡、物鏡鏡片無劃痕、指紋或污漬（必要時(shí)用長纖維棉簽蘸取無水乙醇輕擦）。
載物臺(tái)、調(diào)焦機(jī)構(gòu)無異物卡滯，光源亮度可調(diào)（LED光源需預(yù)熱10分鐘穩(wěn)定）。
功能測試：
開啟電源，驗(yàn)證光源、電動(dòng)調(diào)焦（如配備）、熒光模塊（如配備）等功能正常。
檢查物鏡轉(zhuǎn)換器旋轉(zhuǎn)靈活性，確保物鏡切換無卡頓。
樣本制備
蓋玻片使用：液態(tài)樣本（如細(xì)胞懸液）B須使用蓋玻片（厚度0.17mm），避免物鏡直接接觸液體。
樣本固定：使用專用夾具固定載玻片，防止觀察過程中滑動(dòng)。
二、操作流程規(guī)范：從開機(jī)到關(guān)機(jī)的標(biāo)準(zhǔn)化步驟
開機(jī)與初始化
順序操作：先開顯微鏡主機(jī)電源，再啟動(dòng)圖像采集系統(tǒng)（如相機(jī)、軟件）。
光源校準(zhǔn)：
透射光顯微鏡：調(diào)整聚光鏡高度至物鏡后焦平面（可通過貝朗特實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證）。
熒光顯微鏡：預(yù)熱汞燈/氙燈15分鐘，確保光輸出穩(wěn)定。
調(diào)焦與觀察
低倍物鏡起手：先用4×或10×物鏡對光，避免高倍物鏡直接接觸樣本。
粗調(diào)焦限制：旋轉(zhuǎn)粗準(zhǔn)焦螺旋時(shí)，需時(shí)刻觀察物鏡與樣本間距，防止碰撞（建議保留≥1mm安全距離）。
細(xì)調(diào)焦優(yōu)化：切換至高倍物鏡后，僅使用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)焦，避免粗調(diào)焦引發(fā)樣本漂移。
圖像采集與存儲(chǔ)
參數(shù)設(shè)置：
曝光時(shí)間：根據(jù)樣本亮度調(diào)整（通常10-500ms），避免過曝或欠曝。
白平衡：使用標(biāo)準(zhǔn)白卡校準(zhǔn)，確保顏色還原準(zhǔn)確。
數(shù)據(jù)管理：
圖像文件命名遵循“日期_樣本名_物鏡倍數(shù)”格式（如20250618_HeLa_40X）。
定期備份數(shù)據(jù)至專用服務(wù)器，避免本地存儲(chǔ)丟失。
關(guān)機(jī)與整理
光源關(guān)閉：先關(guān)顯微鏡主機(jī)電源，再拔掉電源插頭（熒光顯微鏡需待汞燈冷卻30分鐘后再關(guān)）。
物鏡歸位：將物鏡轉(zhuǎn)至“八”字位置，防止灰塵落入鏡筒。
防塵覆蓋：套上專用防塵罩，避免空氣中的顆粒物沉積。
三、維護(hù)保養(yǎng)規(guī)范：延長設(shè)備壽命的關(guān)鍵措施
日維護(hù)
清潔：
用洗耳球吹除物鏡、目鏡表面灰塵（禁用嘴吹，防止唾液腐蝕鏡片）。
清潔載物臺(tái)、調(diào)焦機(jī)構(gòu)，去除殘留樣本或污漬。
功能檢查：驗(yàn)證調(diào)焦、光源、物鏡轉(zhuǎn)換等功能正常。
周維護(hù)
光路校準(zhǔn)：
使用激光校準(zhǔn)儀檢查光路準(zhǔn)直性（誤差應(yīng)<0.1mrad）。
調(diào)整聚光鏡數(shù)值孔徑匹配物鏡（如100×物鏡需NA≥1.4）。
潤滑保養(yǎng)：對調(diào)焦機(jī)構(gòu)、載物臺(tái)導(dǎo)軌涂抹顯微鏡專用潤滑脂。
年維護(hù)
專業(yè)檢修：
更換老化光源（LED光源壽命通常>20000小時(shí)，汞燈<300小時(shí)）。
檢測物鏡分辨率（使用星點(diǎn)板驗(yàn)證，MTF>0.4為合格）。
性能驗(yàn)證：
通過標(biāo)準(zhǔn)樣片（如USAF 1951分辨率板）校準(zhǔn)系統(tǒng)分辨率。
測試圖像采集系統(tǒng)的線性度（相關(guān)系數(shù)R2>0.99為合格）。
四、安全注意事項(xiàng)：規(guī)避操作風(fēng)險(xiǎn)的核心原則
電氣安全
接地保護(hù)：確保顯微鏡電源插頭可靠接地，防止漏電風(fēng)險(xiǎn)。
電源適配：使用設(shè)備原裝電源適配器，避免電壓不穩(wěn)損壞電路。
光學(xué)安全
激光防護(hù)：使用激光共聚焦顯微鏡時(shí)，B須佩戴激光防護(hù)眼鏡（波長匹配激光器輸出）。
紫外防護(hù)：熒光顯微鏡觀察紫外激發(fā)樣本時(shí)，需關(guān)閉室內(nèi)照明，避免紫外光泄漏。
化學(xué)安全
樣本處理：使用有機(jī)溶劑（如二甲苯）清潔樣本時(shí)，需在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。
廢液處置：染色廢液需按實(shí)驗(yàn)室規(guī)定收集，避免隨意傾倒污染環(huán)境。
五、操作人員資質(zhì)與培訓(xùn)
資質(zhì)要求
理論考核：通過顯微鏡原理、光路結(jié)構(gòu)、安全規(guī)范等理論考試（≥80分合格）。
實(shí)操認(rèn)證：完成樣本制備、調(diào)焦觀察、圖像采集等實(shí)操考核（由Z深工程師評估）。
持續(xù)培訓(xùn)
新技術(shù)培訓(xùn)：每年參加至少1次顯微鏡新技術(shù)培訓(xùn)（如超分辨技術(shù)、AI圖像分析）。
安全演練：每半年參與1次實(shí)驗(yàn)室安全演練（如化學(xué)泄漏、設(shè)備故障應(yīng)急處理）。
